二、將需滅菌的培養基、蒸餾水或其它器皿放入
滅菌鍋內,關閉鍋蓋,檢查排氣閥、安全閥狀態,
三、打開電源,檢查參數設置是否正確,然后按下“work”鍵,
滅菌鍋開始工作;自動派冷氣,到105℃時,底部排氣閥門自動關閉,然后壓力開始上升;
四、壓力升** 0.15MPa(121℃)時,
滅菌鍋再次自動放氣,然后開始記時,一般培養基滅菌20min,蒸餾水滅菌30min;
五、達到規定的滅菌時間后,關閉電源,打開放氣閥緩慢放氣;當壓力指針降** 0.00MPa時,放氣閥無蒸汽排除時,方可開啟鍋蓋。 六、注意事項
1、汽未放盡前,不得開啟高壓鍋;
2、如果滅菌后的培養基在鍋內不及時拿出,需在蒸汽放盡后將鍋蓋打開,切忌將培養基封閉在鍋內過夜。
3、壓力表指針在0.05MPa以上時,不能過快放汽,以防止壓力急速下降,液體滾沸,從培養容器中溢出。
4、操作過程,請注意安全,小心燙傷。
高溫滅菌鍋的使用方法
1.shou先將內層滅菌桶取出,再向外層鍋內加入適量的水,使水面與三角擱架相平為宜。
2.放回滅菌桶,并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠,以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸,以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。
3.加蓋,并將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓,使螺栓松緊一致,勿使漏氣。
4.用電爐或煤氣加熱,并同時打開排氣閥,使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡后,關上排氣閥,讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時,控制熱源,維持壓力**所需時間。本實驗用 1.05kg/cm2,121.3℃,20分鐘滅菌。 5.滅菌所需時間到后,切斷電源或關閉煤氣,讓滅菌鍋內溫度自然下降,當壓力表的壓力降**0時,打開排氣閥,旋松螺栓,打開蓋子,取出滅菌物品。如果壓力未降到0時,打開排氣閥,就會因鍋內壓力突然下降,使容器內的培養基由于內外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養基而發生污染。
6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時,經檢查若無雜菌生長,即可待用。
不過有幾點要注意的: 1.鍋內必須要有充足的水。 2.鍋的氣密性一定要很好。
3.使用完后一定要放到適合溫度才可以打開。
超凈工作臺原理及使用方法
超凈臺的優點是操作方便自如,比較舒適,工作效率高,預備時間短,開機10分鐘以上即可操作,基本上可隨時使用。在工廠化生產中,接種工作量很大,需要經常長久地工作時,超凈臺是很理想的設備。超凈臺由三相電機作鼓風動力,功率145~260W左右,將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來,形成連續不斷的無塵無菌的超凈空氣層流,即所謂“高效的特殊空氣”,它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細菌孢子等等。超凈空氣的流速為24~30m/min,這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染,這樣的流速也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作,保持無菌材料在轉移接種過程中不受污染。但是萬一操作中途遇到停電,暴露在未過濾空氣中的材料便難以幸免污染。這時應迅速結束工作,并在瓶上作出記號,內中的材料如處于增殖階段,則以后不再用作增殖而轉入生根培養。如為一般性生產材料,因極其豐富也可棄去。如處于生根過程,則可留待以后種植用。
超凈臺電源多采用三相四線制,其中有一零線,連通機器外殼,應接牢在地線上,另外三線都是相線,工作電壓是380V。三線接入電路中有一定的順序,如線頭接錯了,風機會反轉,這時聲音正?;蛏圆徽?,超凈臺正面無風(可用酒精燈火焰觀察動靜,不宜久試),應及時切斷電源,只要將其中任何兩相的線頭交換一下位置再接上,就可解決。三相線如只接入兩相,或三相中有一相接觸不良,則機器聲音很不正常,應立即切斷電源仔細檢修,否則會燒毀電機。這些常識應在開始使用超凈臺時就向工作人員講解清楚,免除不應造成的事故與損失。
超凈臺進風口在背面或正面的下方,金屬網罩內有一普通泡沫塑料片或無紡布,用以阻攔大顆粒塵埃,應常檢查、拆洗,如發現泡沫塑料老化,要及時更換。除進風口以外,如有漏氣孔隙,應當堵嚴,如貼膠布,塞棉花,貼膠水紙等。工作臺正面的金屬網罩內是超級濾清器,超級濾清器也可更換,如因使用年久,塵粒堵塞,風速減小,不能保證無菌操作時,則可換上新的。
超凈臺使用壽命的長短與空氣的潔凈程度有關。在溫帶地區超凈臺可在一般實驗室使用,然而在熱帶或亞熱帶地區,由于大氣中含有高量的花粉,或多粉塵的地區,超凈臺則宜放在較好的有雙道門的室內使用。任何情況下不應將超凈臺的進風罩對著開敞的門或窗,以免影響濾清器的使用壽命。 #p#分頁標題#e#
無菌室應定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒,用2%新潔爾滅抹拭臺面和用具(70%酒精也可),用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸,配合紫外線滅菌燈(每次開啟15分鐘以上)等等消毒滅菌手段,以使無菌室經常保持高度的無菌狀態。接種箱內部也應裝有紫外線燈,使用前開燈15分鐘以上照射滅菌,但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開啟時間較長時,可激發空氣中的氧分子締合成臭氧分子,這種氣體成分有很強的殺菌作用,可以對紫外線沒有直接照到的角落產生滅菌效果。由于臭氧有礙健康,在進入操作之前應先關掉紫外線燈,關后十多分鐘即可入內。
在超凈工作臺上亦可吊裝紫外線燈,但應裝在照明燈罩之外,并錯開照明燈平行排列,這樣在工作時不妨礙照明。若將紫外線燈裝入照明燈罩(玻璃板)里面,這是毫無用處的,因為紫外線不能穿透玻璃,它的燈管是石英玻璃,而不是硅酸鹽玻璃制成的。
接種室內力求簡潔,凡與本室工作無直接關系的物品一律不能放入,以利保持無菌狀態。接種室內的空氣與外界空氣應**隔jue,預留的通氣孔道應盡量密閉。通氣孔道可設上下氣窗,氣窗面積宜稍大,需覆上4層紗布作簡單濾塵。在**工作之后,可開窗充分換氣,然后再予以密閉。總之,既要清潔無塵無菌,又要空氣新鮮,適宜工作。覆在通氣窗上的紗布應經常換洗。但是上述種種措施只是理想的設計方案,往往不易全面做到,其實只要嚴格無菌操作手續,在門窗敞開的室內,有一超凈臺的保護,接種的污染率仍可控制在生產上可以容忍的水平。